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產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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鏈霉親和素的突變體-瓊脂糖凝膠Strep-Tactin 2 NUPharose FF是鏈霉親和素的突變體（Strep-Tactin2配基）和瓊脂糖凝膠偶聯(lián)形成的和層析分離介質，用于分離、純化StrepII或Twin Strep標簽蛋白。Strep II標簽為8個氨基酸的小標簽（WSHPQFEK），一般不影響融合后蛋白質的結構和功能，常用于融合表達蛋白質的檢測和純化。
產(chǎn)品型號：廠商性質：生產(chǎn)廠家更新時間：2024-10-13訪 問 量：1248
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鏈霉親和素的突變體-瓊脂糖凝膠
1 、產(chǎn)品介紹
Strep-Tactin 2 NUPharose FF是鏈霉親和素的突變體（Strep-Tactin2配基）和瓊脂糖凝膠偶聯(lián)形成的和層析分離介質，用于分離、純化StrepII或Twin Strep標簽蛋白。Strep II標簽為8個氨基酸的小標簽（WSHPQFEK），一般不影響融合后蛋白質的結構和功能，常用于融合表達蛋白質的檢測和純化。Twin Strep標簽為兩個StrepII串聯(lián)的標簽，相比Strep II標簽，Twin Strep標簽與Strep-Tactin 2配基的親和力更高。
本產(chǎn)品的Strep-Tactin 2配基與上一代Strep-Tactin 配基相比，對Strep II標簽的親和力進一步提高，與生物-素的親和力大幅削弱。因而本產(chǎn)品能夠更牢固的結合Strep II融合蛋白，在融合蛋白表達豐度較低時，相對捕獲量更高，載量和得率更高。在洗脫方面，可以使用生物-素進行洗脫，比采用昂貴的脫硫生物-素洗脫更經(jīng)濟，且使用后可采用10~50 mM NaOH進行再生。本產(chǎn)品對Strep II標簽具有高度特異性，一般只需一步純化就能獲得高純度的蛋白質樣品。
2 、產(chǎn)品特點與技術指標
產(chǎn)品名稱 | 鏈霉親和素的突變體-瓊脂糖凝膠 |
基質 | 4%交聯(lián)瓊脂糖 |
配基 | Strep-Tactin 2 配基， ≥5 mg/ml |
粒徑范圍 a | 45~ 165 μm |
平均粒徑 | ~90 μm |
動態(tài)結合載量 b | 8~ 10 mg/ml Strep II 標簽蛋白 |
推薦工作流速 | 60~ 150 cm/h |
最大流速與壓力 | >900 cm/h ，0.3 MPa |
使用 pH | 6~ 10（推薦的工作 pH），10~50 mM NaOH（CIP 清洗） |
化學穩(wěn)定性 | 在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、8 mol/L 尿素等。 |
儲存與運輸 | 20%乙醇，2~8 ℃（儲存），2~30 ℃（運輸） |
注：a90%體積以上的微球在此粒徑范圍；bDBC10%測試條件為：10%流穿，大腸桿菌表達的帶Strap II 標簽的增強型綠色熒光蛋白，6 min 停留時間。
3 、Strep II 、Twin Strep 標簽親和層析
Strep-Tactin 2 NUPharose FF對Strep II、Twin Strep標簽蛋白的特異性結合以及純化過程如圖1和圖2所示。
4 、使用方法參考
4.1 色譜柱裝填
以下闡述與層析系統(tǒng)連接時，填料的色譜柱裝填方法。
（1）所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。
（2）填料用量計算：通過沉降定量填料體積，需要的沉降填料體積=柱體積×壓縮比（也稱壓縮因子）。沉降體積是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完-全讀取的穩(wěn)定體積。Strep-Tactin 2 NUPharose FF的壓縮比為1.15 。為使達到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速壓柱。
（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量取相應體積，抽濾除去液體，并用約3倍填料體積的純化水洗滌，重復3次，以除去保存液。
（4）裝柱填料懸液準備：將填料轉移到適當?shù)娜萜髦校尤脒m量的裝柱液，制成50~75 v%的裝柱填料懸液，使用前攪勻。
（5）裝填前準備：在清洗干凈的層析柱下端加入裝柱液，以除去下墊片及層析柱下端的空氣，在柱內保留少量的蒸餾水，擰緊下堵頭，調整柱子使其垂直于地面。
（6）裝填：將攪勻后的填料懸液一次性緩慢倒入層析柱內（必要時使用裝柱器），為避免引入氣泡，應使之沿層析柱內壁自然流下。將所有填料加入后，用裝柱液將裝 柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將柱子與層析系統(tǒng)連接。
（7）壓柱：使柱內填料自然沉降（或50~150 cm/h的低流速下沉降），待填料沉降完-全后（填料與液體的界面清晰），去除裝柱器，裝上上柱頭，并將柱頭下降至界面處；通過高流速（推薦流速見下表，注意柱壓不超過0.3 MPa），繼續(xù)壓柱至界面清晰 穩(wěn)定，標記界面穩(wěn)定時的柱高。停泵，打開柱頭上的閥門/堵頭，關閉柱底的閥門/堵 頭，下壓柱頭至標記位置下方與壓縮比對應的位置，旋緊柱頭，裝柱完成。裝柱完成后，需用高流速平衡柱內的填料。
裝柱條件 | Strap-Tactin 2 NUPharose FF |
壓縮比 | 1.15 |
裝柱流速 | 600 cm/h |
4.2 柱效測定和評價
完成裝柱后、使用前可通過柱效測定和評價可以確認層析柱裝填質量。柱效通常用理論塔板高度（HETP）和非對稱因子（As）來評價。
4.3 平衡與上樣（Equilibration & Loading）
Strep-Tactin 2 NUPharose FF填料的工作pH范圍為6~10，推薦下述緩沖液A為平衡與上樣緩沖液。樣品需作澄清處理，并用緩沖液A稀釋或者換液成緩沖液A。
緩沖液A：100mM Tris-HCl，150mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0。平衡5個柱體積，建議流速為～150 cm/h上樣流速為50~150cm/h，較小的流速有利于載量的提高，可根據(jù)實際結合情況選擇流速，能獲得較好的效果。
4.4 再平衡
上樣后用緩沖液A再平衡5~10 CV，或平衡至基線，洗去雜質，推薦流速為~150cm/h。
4.5 洗脫（Elution）
推薦含10~50 mM的D-生物-素作為洗脫緩沖液，如下述的緩沖液B。
緩沖液B：50mM d-Biotin，100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH8.0。 用洗脫緩沖液洗6-10 CV，建議流速為～150 cm/h。
4.6 再生（Regeneration）
在一次或多次使用后，需要對填料進行再生：水，3~5 CV，～150cm/h；10~50 mM NaOH，3 CV，3 min接觸時間；水，3~5 CV，～150 cm/h；再用緩沖液A平衡5~ 10 CV，150 cm/h。
4.7 填料保存
填料的初始保存液為20%乙醇，使用過后可繼續(xù)用20%乙醇保存。保存溫度在2~8 ℃為宜，不可凍存
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