大家在做ELISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，難免遇到顯色和比色的問(wèn)題，上海信帆生物為大家詳細(xì)講解顯色和比色的問(wèn)題。

TMB 經(jīng)HRP 作用后，約40 分鐘顯色達(dá)，隨即逐漸減弱，至2 小時(shí)后即可*消退至無(wú)色。TMB 的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基*(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間(12-24 小時(shí))不褪，是目視判斷的良好終止劑。此外，各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色，此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀，通常指于測(cè)讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計(jì)。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、度和可測(cè)范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下，操作時(shí)室溫宜在15 -30℃ ，使用前先預(yù)熱儀器 15-30 分鐘，測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測(cè)讀 A 值時(shí)，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm 波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀，即每孔先后測(cè)讀兩次，*次在zui適波長(zhǎng)(W1)，第二次在不敏感波長(zhǎng)(W2)，兩次測(cè)定間不 移動(dòng)ELISA 板的位置，zui終測(cè)得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

肉眼判斷結(jié)果時(shí)，顯色淺不易觀察，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，必須使用酶標(biāo)儀檢測(cè)，以保結(jié)果一致性。

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