酶聯免疫吸附試驗 （又稱酵素免疫分析法 ，Enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA ）利用抗原 抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測；由於結合於固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性 ，因此設計其鍵結機制後，配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，並可利用呈色之深淺進行定量分析。 酶聯免疫吸附試驗 （又稱酵素免疫分析法 ，Enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA ）利用抗原 抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測；由于結合于固體承載物（一般為塑膠孔盤）上之抗原或抗體仍可具有免疫活性 ，因此設計其鍵結機制后，配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗原或抗體是否存在，并可利用呈色之深淺進行定量分析。 根據待測樣品與鍵結機制的不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（ sandwich ）、間接法（ indirect ）、以及競爭法（ Competitive ）三種為主，以下為各種方法之介紹。根據待測樣品與鍵結機制的不同，ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式，主要以三明治法（ sandwich ）、間接法（ indirect ）、以及競爭法（ Competitive ）三種為主，以下為各種方法之介紹。

三明治法

三明治法常用於檢測大分子抗原，一般之操作步驟為:三明治法常用于檢測大分子抗原，一般之操作步驟為:

1. 將具有專一性之抗體固著（ coating ）於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著（ coating ）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結加入待測檢體，檢體中若含有待測之抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結
3. 洗去多餘待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一之一次抗體，與待測抗原進行鍵結
4. 洗去多餘未鍵結一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結洗去多余未鍵結一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結
5. 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果洗去多余未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認，因此專一性相當高，但此待測抗原必須是多價抗原，如此才可獲得兩種以上的專一性抗體，以分別進行夾心；而且此法需要足夠的表位空間以進行抗原抗體的夾心，所以並不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認，因此專一性相當高，但此待測抗原必須是多價抗原，如此才可獲得兩種以上的專一性抗體，以分別進行夾心；而且此法需要足夠的表位空間以進行抗原抗體的夾心，所以并不適用于半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。

間接法

間接法常用於檢測抗體，一般之操作步驟為：間接法常用于檢測抗體，一般之操作步驟為：

1. 將已知之抗原固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘之抗原將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原
2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結加入待測檢體，檢體中若含有待測之一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結
3. 洗去多餘待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結洗去多余待測檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測之一次抗體鍵結
4. 洗去多餘未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。洗去多余未鍵結二次抗體，加入酵素受質使酵素呈色，借儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗原的含量。

競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用於檢測小分子抗原，其操作步驟為：競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

1. 將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上，完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
2. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結
3. 加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由於塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。
4. 洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質使酵素呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。