加樣注意事項：
取出已恢復至室溫的酶標板，加入300微升洗液，以洗去包被抗體保護劑，使包被抗體處于最佳活性狀態，靜置浸泡30秒。洗板結束后，立即使用酶標板，不要讓酶標板干燥。
排版布局H1、H2孔為空白孔，A1、A1至G1、G2為標準曲線的S1至S7孔，每孔加入50微升的Assay Buffer，根據排版，每孔加入50微升標準品和樣本，加樣時，垂直懸空加入液體，加完后槍頭輕輕碰液面（建議標準品，樣本都做復孔），最后每孔加入50微升檢測抗體，加完后用封板膜小心封好酶標板，為讓抗原抗體充分接觸。

洗滌注意事項：

洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，但卻決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA 操作中，洗滌是主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。