ELISA實驗中細胞樣本的收集和處理方法

細胞上清

需保證各組間培養(yǎng)細胞的數(shù)量基本一致，細胞生長狀態(tài)良好。建議采用6孔板培養(yǎng)細胞，并保證細胞數(shù)量達到106左右，即細胞密度達70%-80%左右，即可收集培養(yǎng)液，于2-8℃、1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細胞碎片，取上清檢測。

細胞裂解液

貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每106個細胞中加入150-200μL PBS重懸（推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低，可減少PBS的體積），并通過反復凍融或超聲，使細胞破碎。將提取液于2-8℃、1500×g離心10分鐘，取上清檢測。

■ 反復凍融：-80℃放置1h/液氮放置0.5h，然后置于30℃水浴鍋中，輕微振蕩，使其迅速融化，此操作反復2-3次即可。

■ 超聲方法：用超聲波發(fā)生器，以振幅14μm超聲處理30 s，在冰水浴條件下，破碎細胞；或者使用超聲波破碎儀，200 W，2 s/次，間隙3 s，總時間5 min。

樣本中建議提前加入蛋白酶抑制劑，常規(guī)推薦PMSF：工作濃度:17~174μg/mL(0.1~1mM)。

細胞培養(yǎng)過程中，有許多條件需要摸索，包括細胞類型、培養(yǎng)基組分、細胞數(shù)量、生產(chǎn)狀態(tài)、干預條件和物質(zhì)等。前期基礎打得牢固，對后續(xù)ELISA或其他種類實驗的開展，及結果的分析，具有更多的參考意義。

ELISA實驗中細胞樣本的收集和處理方法