組織樣本中的甘油含量如何檢測(cè)更精確

上海信帆生物供應(yīng)組織樣本甘油檢測(cè)試劑盒，下面我們來(lái)看看如何測(cè)定組織樣本，才能更加精確！

首先我們來(lái)看一下：樣本應(yīng)該如何處理？

組織細(xì)胞裂解

細(xì)胞(包括分化的脂肪細(xì)胞)裂解： 消化、離心收集細(xì)胞。或直接在培養(yǎng)皿內(nèi)裂解。通常6孔板單孔約2x106個(gè)細(xì)胞，75cm2瓶約1x107細(xì)胞。按比例每 1~2 x 106細(xì)胞加 0.1ml 裂解液，混勻，靜置 10 分鐘。

動(dòng)物組織裂解：

切記要預(yù)先將新鮮組織剪切稱(chēng)重后再進(jìn)行保存。組織凍存后再進(jìn)行解凍、剪切、稱(chēng)重可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的測(cè)量誤差。離心管精確稱(chēng)重，加入組織塊后再稱(chēng)重，二者相減(即減量稱(chēng)重法)計(jì)算組織量(約 100mg)。強(qiáng)烈建議按比例每 1mg 組織加10µl裂解液以減少樣品間蛋白和脂質(zhì)含量變異而產(chǎn)生的誤差。（注意；裂解液用量在 1ml 或更多可保證有效的裂解與脂質(zhì)提取）。用電動(dòng)高速勻漿器或手動(dòng)玻璃勻漿器破碎組織。（不推薦超聲方法，因其不能*和均勻破碎。應(yīng)根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整初始的組織細(xì)胞加入量），而后，靜置 10 分鐘。

二. 裂解液處理：

1. 取適量上清液轉(zhuǎn)移到 1.5ml 離心管中，進(jìn)行步驟

2 的操作。余下的裂解液可用 BCA 法蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量或－20oC 儲(chǔ)存。

2. 70oC 加熱 10 分鐘滅活脂肪酶，可能出現(xiàn)絮狀沉淀。

3. 室溫 5000rpm 離心 5 分鐘，上層清液即可用于酶學(xué)測(cè)定。

注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí)，可將待測(cè)樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進(jìn)行測(cè)定，但是如果樣品體積超過(guò)100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度，使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過(guò)線(xiàn)性范圍，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)缓蟾鶕?jù)稀釋倍數(shù)來(lái)計(jì)算樣品中甘油濃度。）

 組織樣本中的甘油含量如何檢測(cè)更精確