上海信帆生物提供Western Blot實驗代測服務

Western blot簡介    蛋白質印記又稱印記，根據抗原抗體的特異性結合檢測樣品中的某種蛋白的方法。它是利用特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。 Western blot的原理    Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。    以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。Western blot樣本要求客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）。樣品要求為： 1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。2、細胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。 Western blot結果及數據提供內參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實驗報告，包括整個試驗流程所涉及的實驗數據和實驗步驟。如需進行蛋白純化服務，將提供檢測報告Western blot實驗服務服務內容我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務，如需要還可進行灰度分析。說明1、建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白或有陽性表達的細胞或組織）作為陽性對照。2、每張膜檢測1-8個樣品。3、如果一抗由客戶提供，請在正確條件下保存，避免污染及反復凍融。

Western Blot實驗 免疫印跡實驗免疫反應：

1. 用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。

2. 加入包被液，平穩搖動，室溫2hr。

3. 棄包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。

4. 加入一抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋，液體必須覆蓋膜的全部），4℃ 放置12hr以上。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其余步驟與實驗組相同。

5. 棄一抗和1%BSA，用0.01M PBS分別洗膜，5min×4次。

6. 加入辣根過氧化物酶偶聯的二抗（按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋），平穩搖動，室溫2hr。

7. 棄二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。

8. 加入顯色液，避光顯色至出現條帶時放入雙蒸水中終止反應。

四、Western Blot實驗 免疫印跡實驗注意事項

1、Western Blot實驗免疫印跡實驗一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經過預實驗確定*條件。

2、Western Blot實驗免疫印跡實驗顯色液必須新鮮配置使用，zui后加入H2O2。

3、Western Blot實驗免疫印跡實驗DAB有致癌的潛在可能，操作時要小心仔細。

 尊敬的客戶：本公司有放射技術服務、蛋白質組學服務、組化、PCR技術服務、生物信息學數據分析等，如果您想了解Western blot的更多內容或者其他服務信息，您可以咨詢上海信帆生物科技有限公司，了解更多產品的詳細信息，至善至美的服務是我們永無止境的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產品，我們將竭誠為您服務！

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